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> Mal Wieder Anfängerfragen-pilzgrow, Methodik verbessern

post Mar 18 2023, 22:33
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Salvianaut
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Wenn die Petris einige Zeit bei Zimmertemperatur herum liegen, siehst du ja, ob was wächst oder nicht. Es ist durchaus interessant, wie hoch die Ausfallrate ist.
Ich bin einen anderen Weg gegangen, was auch das Kondenswasserproblem löst.
Ich gieße die Petris einfach unsteril, dann werden sie in Autoklaven-Sterilverpackungen eingeschweißt (Melag Melafol) und dann sterilisiert. Ich verwende inzwischen auch kein Agar mehr, sondern Gellan. Das ist Agar weit überlegen. Es ist mehrfach autoklavierbar und schmilzt auch nicht mehr, wenn es einmal fest geworden ist. Dadurch ist das Handling der Petris beim Autoklavieren überhaupt kein Problem, weil sich in den Petris keine Suppe mehr bildet.

Da die Rückseite der Sterilverpackung dampfdurchlässig ist, trocknen die Petris innen sauber ab, wenn man sie einige Tage bei Raumtemperatur herum liegen lässt.

Original: https://abload.de/img/petrissterilsif1k.jpg



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post Apr 9 2023, 01:18
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Nachdem ich ein paar Kontis auf den Platten hatte und ich die kontaminierten Platten nochmal genau analysiert habe, um daraus Verbesserungen für die Zukunft abzuleiten, machte ich eine interessante Feststellung, die mich sehr verwundert hat, mich aber auch optimistisch stimmt. Ich stellte nämlich zu meiner Verwunderung fest, dass bestimmt 80% der Kontis nicht auf der Oberfläche der Platte waren, sondern am Boden. Dh. da muss in der Petrischale selber noch etwas unsteril gewesen sein, obwohl die aus dem Dampfkochtopf kamen und ich sie noch mit Flächendesinfektion eingesprüht habe, nachdem sie kurz in der Raumluft waren. Der Fokus der Vorsicht bei mir lag aber auf der Oberfläche. Von dort ausgehend hätte ich die meisten Kontis erwartet, die aus der Raumluft der SAB-Box dann auf das Agar fallen. Es ist auf jeden Fall interessant, wie man daraus lernen kann, wo hier Fehlerquellen im Bearbeitungsprozess sind. Aber Kontis am Boden sind um Welten leichter zu vermeiden, als Kontis die aus der Luft kommen und die Handhabung in der Box noch kritischer machen würden, bzw. man den Raum in der Box noch steriler gestalten müsste.

Die Idee die Platten erst nach dem Giessen zu sterilisieren, ist auch echt gut! w00t.png
Ich glaube es gibt kaum etwas, wo man so viel praktisches Wissen über Verfahrenstechnik in der Mikrobiologie lernt, wie in der Pilzzucht. good.gif


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post Apr 9 2023, 18:30
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QUOTE(kleinerkiffer84 @ Apr 9 2023, 01:18)
Ich stellte nämlich zu meiner Verwunderung fest, dass bestimmt 80% der Kontis nicht auf der Oberfläche der Platte waren, sondern am Boden.


Wie hast du das Agar-Gel sterilisiert? Kannst du erkennen, was es für ein Kontaminant ist?
Denn es ist auch denkbar, dass das nicht ausreichend sterilisiert war. Kontis sind an größere Partikel gebunden. Wenn dort was überlebt hat, ist es logisch, daß die zu Boden sinken. Auch hier lauern viele Fehlerquellen. Beispielsweise erreichen Flaschen, die mit verbleibender Restluft dicht verschlossen sind, im Kopfbereich niemals die Temperatur des Sattdampfs. Auch andere Luftnester erreichen die Dampftemperatur nie. Moderne Autoklaven verwenden daher Vakuumphasen, um Restluft sicher zu entfernen. Alte Autokaven haben das mit mit einer ausgeklügelten Dampfführung nach dem Schwerkraftprinzip gemacht, um Luft sicher heraus zu spülen. Beim Schnellkochtopf ist das nicht ohne weiteres gegeben und es lauern viele Fallstricke, wo du vll. nur 100°C erreichst. Sporenbildner überleben die Aktion dann problemlos.


QUOTE(kleinerkiffer84 @ Apr 9 2023, 01:18)
Ich glaube es gibt kaum etwas, wo man so viel praktisches Wissen über Verfahrenstechnik in der Mikrobiologie lernt, wie in der Pilzzucht. good.gif
Ja, man lernt wirklich fürs Leben. Kontaminationen spielen nämlich überall eine Rolle. Im Haushalt, in der Küche, bei Lebensmitteln. Je mehr du weißt, was du bei jedem Handgriff tust, desto mehr profitierst du auch in anderen Bereichen davon.


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post Apr 10 2023, 01:36
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Ich habe eine kleine 100ml Glasflasche mit Wasser genommen, darin das Agar gelöst, etwas Pepton dazu und dann im Dampfkochtopf für 30 Minuten sterilisiert, so wie die normale Nährlösung für Flüssigmycel.
Das wäre möglich, dass die Agarlösung selber punktuell nicht richtig steril war, denn die Petrischalen selber hatte ich für mein Empfinden ausreichend sterilisiert.

Leider habe ich vergessen zu überprüfen, um welche Art von Kontamination es sich handelt.
Ich hatte die Petrischalen schon wieder gesäubert, als mir einfiel, dass ich eine Probe der Kontis unter dem Durchlichtmikroskop hätte betrachten sollen. Das werde ich aber bei der nächsten Konti machen. Ich habe hier ein für den Hausgebrauch lichtstarkes Mikroskop stehen, mit dem man bis ca. 1000x mit sinnvoller Lichtstärke vergrößern kann. Damit müsste man relativ sicher erkennen, ob es sich um Bakterienkolonien oder Pilze handelt.

Ich glaube ich werde beim nächsten Versuch die Lösung auf jeden Fall erstmal um 10 Minuten länger sterilisieren, damit sich die Wahrscheinlichkeit erhöht, die Keimzahl wirklich durchgehend auf ein Minimum zu reduzieren.

Was ich mir auch noch überlegt habe, ist, dass man nach dem Giessen der Platten, diese einfach an der Oberfläche noch mit H2O2 zu besprühen könnte, um für noch weitere Keimtötung zu sorgen, denn nach der Reaktion von H2O2, bleibt am Ende nur H2O übrig, was die Kultur bei der späteren Beimpfung nicht beeinträchtigt.

Womit verschliesst du eigentlich Agarplatten?
Ich wollte das zuerst mit Parafilm machen, musste aber dann feststellen, dass dieser nicht hält, bzw. nicht klebt und irgendwann runter rutscht. Dann habe ich 3M-Microporeband benutzt und eine Art Frischhaltefolie wie man sie für Zweige benutzt die man an Bäume befestigt.


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post Apr 10 2023, 13:28
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Die Flasche im Schnellkochtopf kann durchaus eine Fehlerquelle sein, wenn sie so verschlossen ist, daß die Luft im Kopfraum nicht entweichen kann. Es kann sinnvoll sein, solche Flaschen nur mit einem Wattestopfen zu verschließen.

H2O2 darf man nicht überbewerten. Verdünnt ist es praktisch wirkungslos und 30% zu versprühen, ist lebensgefährlich. Wenn man Aerosole einatmet, merkt man das anfangs kaum, kann aber später eine lebensbedrohliches Lungenödem entwickeln. Zum Verschließen verwendet man im Labor meistens Parafilm. Ersatzweise geht auch Frischhaltefolie ganz gut. Man reißt einen Streifen von etwa 5cm Breite ab und dehnt sie beim Umwickeln so, daß sie gerade noch nicht reißt. Dadurch haftet sie sehr gut. Die Petris in den Sterilverpackungen verschließe ich gar nicht, daß Dampf eindringen und auch wieder entweichen kann. Dadurch verschwindet das Kondenswasser völlig. Verschließen muß ich erst nach dem Beimpfen.


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post Apr 12 2023, 20:56
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Jetzt habe ich mal ein Foto gemacht, von der Agarplatte, auf der das Wachstum so weit ist, dass man es mit der Handykamera gut erkennt.
Am Rand scheinen noch 2,3 Punkte Kontis zu sein, die mit den Sporen auf die Platte gekommen sind, weshalb ich dann nochmal ein sauberes Stück entnommen und auf eine neue Platte überimpft habe.

Original: https://i.imgur.com/3mGNARZ.png

Original: https://i.imgur.com/g6tl3RO.jpg


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post Apr 15 2023, 17:50
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Heute habe ich mal ein Stückchen Mycel von einer Agarplatte runter gefummelt
und mit einer Spritze und sterilem Wasser in eine Nährlösung für Flüssigkulturen übertragen.
Mal schauen, was daraus wird.

Original: https://i.imgur.com/QyjZIPW.jpg


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post Apr 15 2023, 21:43
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Das Arbeiten mit Petris, ist der beste Weg, um auch mit Kontis umgehen zu können. Mit Flüssigmycelien und Sporenspritzen direkt ins Substrat, geht das immer in die Hose. Bei bakteriellen Kontis kann man auch mit Antibiotikanährböden wahre Wunder bewirken. Besonders interessant ist Gentamicin(sulfat). Denn das ist autoklavierbar, während die meisten anderen Antibiotika nicht genügend hitzestabil sind.


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post Apr 24 2023, 17:41
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Die übertragene Kultur von der Agarplatte wächst in der Flüssigkultur vor sich hin. smile.gif

Original: https://i.imgur.com/xWMn5fz.jpg

Original: https://i.imgur.com/ffRoiMk.jpg


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post Apr 30 2023, 02:29
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Eine neue überimpfte Agarplatte mit Cubensis-Mycel smile.gif

Original: https://i.imgur.com/Ya2Difq.jpg


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post May 5 2023, 01:01
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Hier führe ich gerade noch einen weiteren Test durch, mit einem sehr feinen Buchenholzsubstrat.
Ich teste immer wieder neue Abwandlungen von Substrat für Holzbewohner um unter Umständen neue zündende Ideen zu finden.
Das sind keine klassischen Chips, sondern fein zerkleinertes Holz, dass teilweise schon eine faserige Struktur hat.
Das habe ich dann noch in Wasser aufgekocht und 3 Tage stehen lassen.
Der Azurescens scheint darin sehr vital zu explodieren. w00t.png

Original: https://i.imgur.com/zQaP0ur.jpg


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post May 5 2023, 22:51
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Buchenholzsubstrate und gefräßige Holzzersetzer machen immer Spaß, denn dabei kann kaum was schief gehen. good.gif
Viele Stämme von Holzzersetzern lassen sich aber auch gut auf Getreide o.ä. umgewöhnen. Für viele scheint das auf den ersten Blick ein sinnfreies Unternehmen, weil die Kontaminationsgefahr viel höher ist. Doch nicht nur Kontaminanten sind da gefräßiger, sondern die Mycelien auch. Man dadurch alles beschleunigen, wenn man die Sterilität so weit im Griff hat, daß man Rückschlägen durch Kontaminanten gelassen entgegen sehen kann.

Es freut mich sehr, daß du an den Pilzen dran bleibst. Und das ganz besonders, weil du mit anderen Substanzen unglaublich viel Erfahrung in einer Vielzahl wie nur ganz wenige von uns hast. Ich finde es einfach schön, einen permanent nach wachsenden, unkomplizierten und toxikologisch ungefährlichen Rohstoff zu haben, der uns alle überleben wird.







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post May 14 2023, 02:17
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Ich poste mal wieder ein Update der Pilz-Kulturen. smile.gif
Von den beiden Beuteln mit Roggensubstrat hatte einer eine Konti, aber der andere scheint nun sauber und zügig zu wachsen.
Ansonsten experimentiere ich viel mit Agarplatten, entnehme davon dann Mycel, überimpfe es bis es möglichst isoliert ist, und erzeuge dann Flüssigkulturen, mit denen ich dann das eigentliche Substrat beimpfe.

Original: https://i.imgur.com/pgUJfo9.jpg

Original: https://i.imgur.com/tYgtll5.jpg

Original: https://i.imgur.com/jXntLMi.jpg

Original: https://i.imgur.com/n62RWfs.jpg

Original: https://i.imgur.com/Zbl7zNu.jpg


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post May 26 2023, 21:35
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Ein paar aktuelle Impressionen smile.gif

Original: https://i.imgur.com/ooWMs1y.jpg

Original: https://i.imgur.com/eXOXyJ9.jpg

Original: https://i.imgur.com/8F6tVXO.jpg


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post Jun 3 2023, 02:17
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Heute habe ich wieder etwas mit Agarplatten herumlaboriert.
Sporen von Psilocybe ovoideocystidiata warten hier gerade darauf zu keimen und zu einer schön rhizomorphen Platte zu gedeihen. smile.gif

Original: https://i.imgur.com/W4ipZqp.jpg


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